27-30 septiembre 2016
AECID - Centro de formación, Centro Cultural de España y Cooperativa Bancaria
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Centro de Formación - Atrio

Diseño, síntesis y caracterización in-vivo de un potencial agente de imagen molecular de la angiogénesis tumoral

Oradores

  • Carolina PERRONI
  • Juan Pablo GAMBINI

Autores principales

Coautores

  • Juan Pablo GAMBINI (Centro de Medicina Nuclear, Facultad de Medicina, Universidad de la República, Montevideo, Uruguay)
  • Ximena CAMACHO (Centro de Investigaciones Nucleares, Facultad de Ciencias, Universidad de la República, Montevideo, Uruguay)
  • María Fernanda GARCÍA (Centro de Investigaciones Nucleares, Facultad de Ciencias, Universidad de la República, Montevideo, Uruguay)
  • Marcelo FERNÁNDEZ (Centro de Investigaciones Nucleares, Facultad de Ciencias, Universidad de la República, Montevideo, Uruguay)
  • Pablo CABRAL (Centro de Investigaciones Nucleares, Facultad de Ciencias, Universidad de la República, Montevideo, Uruguay)
  • Eloísa RIVA (Cátedra de Hematología, Hospital de Clínicas, Facultad de Medicina. Universidad de la República, Montevideo, Uruguay.)

Resumen de contenido

Introducción:

El melanoma causa más del 75% de las muertes por cáncer de piel a nivel mundial, con un incremento anual de la incidencia en la última década. Por lo cual, el desarrollo de nuevas estrategias de adquisición de imágenes para controlar estos procesos tumorales, nos podrían ayudar a avanzar en la comprensión del cáncer y garantizar un seguimiento longitudinal de la respuesta tumoral. Una estrategia que ha sido considerada en oncología es el empleo de proteínas radiomarcadas, con el propósito de monitorear terapias anti-antigénicas. Una de las moléculas anti-angiogénicos desarrolladas, es el anticuerpo monoclonal humanizado Bevacizumab anti-VEGF-A165, capaz de inhibir la unión del VEGF-VEGFR-1/2 sobre la superficie de las células endoteliales, neutralizando su actividad biológica y deteniendo la actividad tumoral.

Objetivos:

El objetivo del presente trabajo es sintetizar, caracterizar y desarrollar un agente de imagen basado en la marcación con 99mTc de los fragmentos Fab´s del anticuerpo Bevacizumab para su aplicación en el diagnóstico de la angiogénesis tumoral asociada al melanoma.

Metodología:

La obtención de los fragmentos Fab´s se realizó mediante la digestión con Papaína del anticuerpo Bevacizumab y posteriormente se realizó su purificación empleando una columna de proteína A. Se controló su obtención mediante; electroforesis en gel de poliacrilamida (SDS-PAGE al 10 % en condiciones no reductoras), cromatografía líquida de alta presión (HPLC) y por espectrometría de masa (MALDI-TOF/TOF).

Los fragmentos Fab`s obtenidos fueron derivatizados con el agente quelante bifuncional NHS-HYNIC-Tfa y marcados con 99mTc utilizando Tricina/SnCl2.2H2O. La pureza radioquímica se determinó mediante ITLC-SG y HPLC. La estabilidad in-vitro se evaluóen solución, suero y a distintas concentraciones de L-Cisteína hasta 4 h.

Resultados:

El rendimiento de la digestión del anticuerpo Bevacizumab fue de aproximadamente un 80 % y el Fab presentó un peso molecular de 48 kDa y una relación 1:1 de molécula de HYNIC por molécula de Fab.

Se logró separar el conjugado HYNIC-Fab(Bevacizumab) del HYNIC libre recuperándose ≥ 90% de la cantidad de Fab inicial. La eficiencia del marcado de 99mTc-HYNIC- Fab(Bevacizumab) fue > 90 %. La pureza radioquímica en solución y suero y a distintas concentraciones de L-Cisteína fue > 90 %, no observándose descomposición significativa luego de incubación a 37ºC durante 4 h.

Conclusiones:

Los fragmentos Fab`s del Bevacizumab fueron rápidos de obtener, conjugar y marcar, demostrando alta estabilidad y pureza radioquímica.

Apoyo en la investigación:

Espacio Interdisciplinario, Laboratorios Roche del Uruguay, ANII, Pro.In.Bio, PEDECIBA Química.