27-30 septiembre 2016
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Centro de Formación - Atrio

Las plaquetas humanas como biomarcador de estrés metabólico sistémico

Oradores

  • Santiago MANSILLA

Autores principales

Resumen de contenido

Las plaquetas son células sanguíneas anucleadas que se originan del citoplasma de los megacariocitos en la médula ósea, siendo su concentración sanguínea entre 150 y 400 mil por µL. Si bien en extendidos de sangre periférica se observan como fragmentos citoplasmáticos de 2 a 3 µm de diámetro, son células complejas, activas desde el punto de vista metabólico que interactúan con su ambiente y desencadenan la hemostasia. Las plaquetas se adhieren (al colágeno subendotelial), se agregan (entre sí) y secretan sus gránulos hacia el espacio intravascular durante el proceso de activación plaquetaria, procesos esenciales para la correcta hemostasis.

En los últimos años se ha postulado que las plaquetas podrían utilizarse como biomarcadores de un gran número de patologías sistémicas no relacionadas con la hemostasia, tales como enfermedades neurodegenerativas, enfermedades cardiovasculares, cáncer y diabetes, entre otras enfermedades que cursan con disfunción mitocondrial.

Se ha demostrado que la bioenergética celular en condiciones basales de las plaquetas es alterada en presencia de dichas patologías debido a la exposición de las mismas durante la maduración en la médula ósea a condiciones de estrés metabólico e inflamatorio sistémico. Las plaquetas responden a estas señales mediante cambios en el metabolismo celular, particularmente en la vía de la glucólisis y en la fosforilación oxidativa mitocondrial.

Las plaquetas tienen una vida media corta (5-7 días); presentan gran disponibilidad, ya que pueden obtenerse por purificación desde una muestra de sangre periférica y son incapaces de reemplazar sus mitocondrias por la falta de ADN nuclear. Todas estas características convierten a estas células en un buen biomarcador de estrés metabólico.

Gracias al aumento en la sensibilidad de los equipos, y la disponibilidad de inhibidores mitocondriales específicos, ahora es posible determinar el funcionamiento mitocondrial de las células aisladas de sangre periférica y a su vez el cambio de pH relacionado a la glucólisis, mediante analizadores de flujo extracelulares.

El objetivo general de este proyecto es poner a punto el método para evaluar la función mitocondrial en plaquetas humanas aisladas mediante el uso de un analizador de flujo extracelular. El cumplimiento de este objetivo permitirá diseñar un protocolo para poder evaluar en un futuro el progreso de algunas patologías crónicas que cursan con disfunción mitocondrial así como la respuesta al tratamiento.

Posteriormente a la obtención del consentimiento informado se realizaron ensayos donde a partir de sangre obtenida con anticoagulantes se pusieron a puntos diversas variables: a) incorporación de buffer de lisis de glóbulos rojos durante la purificación de plaquetas, b) recuento plaquetario con varios métodos, c) uso de adherentes celulares en la placa, d) concentración óptima de células a ensayar, e) optimización de la concentración de inhibidores y desacoplantes de la respiración mitocondrial.

Los resultados obtenidos hasta el momento se mostrarán y discutirán en el póster.

Palabras clave

plaquetas, biomarcadores, bioenergética.